尊龙凯时的细胞培养条件包括气相成分95%空气和5%二氧化碳，适宜的培养温度为37℃。在细胞传代时，建议首次传代比例为1:2，每两天更换培养液。为获得最佳运输效果，细胞在良好状态下应灌满完全培养液并严密封闭瓶口。收到细胞后，请使用75%酒精对整瓶细胞进行消毒，之后在超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态，然后再进行后续处理。观察细胞生长情况时，请使用显微镜拍照记录，建议拍摄40x、100x、200x倍的照片，每种倍数各一张。前三天的照片将成为重要的售后依据，若不提供照片，则默认收到的细胞状态良好。

尊龙凯时的细胞培养步骤如下：

细胞传代

- 若细胞汇合度未超过80%，请将培养瓶中的完全培养液收集至离心管中，保留5ml完全培养基，并置于37℃、5% CO2孵箱中培养；若细胞密度超过80%，则可进行传代。

- 对于贴壁细胞的传代，请按照以下步骤：

1. 弃去上清液，使用不含钙镁离子的PBS清洗细胞1-2次。
2. 加入约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液至培养瓶中，放置于37℃培养箱中消化1-2分钟；观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并开始脱落，立即轻敲培养瓶并加入5ml以上的完全培养基来终止消化。
3. 轻轻吹打让细胞完全脱落，并吸出悬液，转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液以1:2的比例分瓶传代（两个T25瓶），添加新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5% CO2的培养箱中培养。

悬浮细胞的传代步骤

- 半换液法：将培养瓶竖着放置于培养箱中静置约1小时，轻轻吸掉约3ml的培养基，然后补充3ml的完全培养基。如培养基变色缓慢，可直接添加约500ul FBS。在传代时，可以直接补充5ml培养基进行分瓶培养，通常此方法传代3次后可用离心法传代以去除死细胞。

- 离心换液法：如需分瓶，将细胞悬液收集至离心管中，1000rpm离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml培养液重悬混匀，然后按照1:2比例分到新T25瓶中，补充6-8ml按照说明书配置的新完全培养基以保证细胞的生长活力，后续传代根据实际情况以1:2~1:5的比例进行。

细胞冻存

- 当细胞覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液并用PBS清洗一次；添加约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液至培养瓶，观察细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打使细胞脱落，然后转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟；弃去上清后，沉淀细胞加入1ml尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻存管中；将冻存细胞直接放入-80℃冰箱中，如需转入液氮罐，则需在-80℃冰箱存放至少24小时后再进行转移。

细胞复苏

- 从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），快速置入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，之后用75%的酒精擦拭冻存管外壁；将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟；弃去上清，用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶中，置于37℃、5% CO2培养箱中培养；第二天更换为新鲜完全培养基继续培养。

注意事项：有些细胞附着不牢，在运输过程中可能会发生细胞脱落，这是正常现象。如脱离较多，应将培养瓶内所有培养液收集至离心管中，1000rpm离心5分钟，将上清液用于过渡培养（后续对比培养），沉淀中的细胞加入1-2ml胰酶，轻轻吹打，重悬，消化1-2分钟后加入5ml完全培养基终止反应。再离心，弃去上清，加入1-2ml完全培养基重悬。最后按照1:2比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的培养箱中继续培养。